甜瓜

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TUhjnbcbe - 2023/5/7 22:28:00

全文共字,阅读时间约为3分钟甜瓜是全国乃至全球普遍种植的一种经济作物,果实口感佳、营养丰富、品味独特,是一种广受人们喜爱的食用果品。大多数研究表明,植物的基因型是其器官发生的主要影响因素。

随着植物基因工程的发展,通过转基因技术改良甜瓜品质成为新的研究热点。这为提高甜瓜品质和抗逆性开辟了更加安全可靠、快捷可行的途径。建立甜瓜高效再生体系是遗传转化的基础,基因型不同。

其再生能力也会受到很大的影响,种间、品种之间的再生能力、再生频率差异显著。这就需要使用的抗生素在不伤害或少伤害受体材料的同时,能完全抑制农杆菌的生长。接下来借助四个章节,对过去对葫芦科的甜瓜有关研究提供的数据。

讲述不同基因型、不同激素浓度配比及抗生素胁迫对其不定芽萌发的影响。在对种植结果统计数据进行罗列,了解如何成功优化甜瓜的再生体系。从方法介绍,到统计与分析阶段,最终进行结果展示。

一、方法

1、种子消毒

挑选大小均一、籽粒饱满的种子,于清水中浸泡6-8小时种子去壳。在75%的乙醇中振荡30秒倒出乙醇,用无菌水清洗2次,倒入0.1%氯化汞浸没种子均匀晃动5-8min。倒出氯化汞,再使用无菌水清洗4-6次,每次约30秒。倒出里面的无菌水,种子表面的水分用无菌滤纸吸干。

2、甜瓜不定芽的诱导

将生长5天左右的甜瓜81×83无菌苗子叶外植体接种于M秒培养基上,该培养基附加不同浓度的6-BA、NAA。在光照(lx)16小时/黑暗8小时,温度25摄氏度条件下培养,21天后统计甜瓜外植体的出愈率和出芽率。

3、甜瓜不定芽生根

基本培养基为,1/2M秒培养基。挑选长度为3-5cm的甜瓜81×83无根苗,用手术刀切除底部多余的愈伤组织,将无根苗接入分别添加不同浓度NAA的1/2M秒培养基中。

每个处理接种10瓶,每瓶接4株无根苗。培养环境是光照(lx)16小时/黑暗8小时,温度25摄氏度,观察生根情况。

二、统计与分析

成苗率=成苗数/接种数×,再生频率/%=发生不定芽的外植体数/供试外植体总数×。增殖系数=(新增芽数+伸长芽数)/供试再生芽数×,生根率=生根外植体数/供试外植体总数×。借助秒P秒19.0统计软件,采用天多重比较法进行数据处理分析。

三、结果展示

1、甜瓜无菌苗萌发

甜瓜种子的发芽率,也因基因型的不同而出现较大的差异。成苗率为10%-93%,T35、82ck基因型的甜瓜种子发芽率均达到90%及以上,而T8基因型的甜瓜种子成苗率只有10%。

出现此现象可能是由于种子状态不佳,此基因型的种子壳大易破且种仁极软,在去壳过程中遭到一定程度的破坏。

2、不定芽的伸长及增殖培养

甜瓜不定芽的最适宜伸长培养基为,M秒+6-BA0.3毫克·L-1+3%蔗糖+0.7%琼脂。在这种激素质量浓度下,不定芽生长的速度最快,且没有出现玻璃化现象。

经15天就可以获得3-5cm,高且健壮的试管苗。当激素质量浓度逐渐升高时,发现新增不定芽数也逐渐增加。这一结果与前期不定芽诱导结果相似,6-BA质量浓度越接近1.0毫克·L-1,不定芽发生越多。

3、生根培养

无根苗的生根情况,根据实验数据了解,对照的生根率最高达到90%。当NAA激素质量浓度逐渐升高时,无根苗的生根率逐渐下降。高质量浓度的NAA,对根的发生有一定的抑制作用。此结果可以得出,无激素添加的培养基生根率最高。

四、抗生素对甜瓜不定芽耐受性的影响

1、卡那霉素对甜瓜不定芽耐受性的影响

从不同质量浓度梯度Kan+M秒+1.0毫克·L-16-BA的培养结果,可以看出,甜瓜子叶愈伤组织形成受到了不同程度的影响,不定芽同样受到了抑制。但是添加了抗生素的培养基基本无污染,较好地抑制了菌的生长。随着Kan质量浓度的增加,不定芽的发生数呈下降趋势。

当Kan的质量浓度达到20毫克·L-1时,外植体都发生大量的愈伤组织。但是发生不定芽的外植体很少,且不定芽数也极少。

当Kan的质量浓度达到30毫克·L-1时,再生频率为0。而5毫克·L-1的Kan与对照相比,再生频率相对较高。由于对照中未添加抗生素,所以有一部分发生污染。少量的抗生素有效地抑制了菌的产生,间接提高了不定芽的再生频率。

2、氨苄青霉素对甜瓜不定芽耐受性的影响

氨苄青霉素(Amp),对甜瓜不定芽再生的抑制作用不是很明显。从实验数据可以得知,前4种Amp质量浓度的培养基中,无明显抑制现象。当氨苄青霉素质量浓度为毫克·L-1时,不定芽再生率最高,达到90.00%。

当外植体处于0、50、、、毫克·L-1Amp条件下培养时,其再生能力并没有较大程度的差异。当抗生素质量浓度上升到毫克·L-1时,外植体不定芽再生频率明显降低。

但再生频率仍然能够达到50%,因此,进行遗传转化时可以使用氨苄青霉素作为农杆菌生长的抑制剂。由数据的结果可知,在芽诱导阶段,甜瓜子叶外植体在不同激素质量浓度配比的M秒培养基上可诱导出不定芽丛或愈伤组织。

培养基为M秒+1.0毫克·L-16-BA时,再生率能达到92.5%,高质量浓度的6-BA诱导易出现丛芽。另外子叶芽诱导时出现极性现象,即不定芽总是出现在子叶近轴端。

对此也有许多国内外学者,进行了研究和报道。在报道中可了解,在不定芽诱导过程中,加入少量的抗生素可抑制菌的产生。试验结果显示毫克·L-1的氨苄青霉素可以抑制菌的生长,一定程度促进了不定芽的分化。

质量浓度升高至毫克·L-1时,对不定芽的分化有一定的抑制作用,再生频率显著下降。因此进行遗传转化时,可以使用氨苄青霉素作为农杆菌生长的抑制剂。

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